半微量定氮法測(cè)定肉中的揮發(fā)性鹽基氮
揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N)能有效地反映肉的新鮮度,新鮮肉、次鮮肉、變質(zhì)肉之間揮發(fā)性鹽基氮的差異非常明顯,并與感官變化一致,是評(píng)定肉的新鮮度變化的客觀指標(biāo)。目前,通常采用半微量定氮法測(cè)定肉中的揮發(fā)性鹽基氮,但該方法有操作過程繁瑣、費(fèi)時(shí)的缺點(diǎn),其次在加樣蒸餾時(shí),堿的作用會(huì)使反應(yīng)室內(nèi)樣液劇烈沸騰而發(fā)泡,帶有氧化鎂顆粒的泡沫往往會(huì)污染反應(yīng)室頂部使其難以清洗。自動(dòng)定氮儀具有自動(dòng)加液、蒸餾、吸收等功能,操作簡單、省時(shí)快速、結(jié)果準(zhǔn)確,被廣泛應(yīng)用于各類食品和飼料等的蛋白質(zhì)測(cè)定,但應(yīng)用在肉中測(cè)揮發(fā)性鹽基氮的報(bào)導(dǎo)較少,且尚無標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定方法。
1材料與方法
1.1材料與儀器
材料:羊后腿瘦肉。
主要儀器為:凱氏定氮儀;AAR2140萬分之一電子天平;微量滴定管。
試劑:均為分析純。
1.2方法
1.2.1鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制量取38%的濃鹽酸9 mL于容量瓶中,以蒸餾水稀釋定容至1 000 mL。此溶液約為0.1 mol/L,再進(jìn)一步稀釋至0.010 mol/L,標(biāo)定后濃度精確到0.000 1 mol/L。
標(biāo)定方法:取3 g～5 g無水碳酸鈉,置于5 cm扁形稱量瓶中,270℃～300℃灼燒至恒重的工作基準(zhǔn)試劑無水碳酸鈉0.02 g,溶于50 mL蒸餾水中,加10滴溴甲酚綠-甲基紅指示液,用配制好的鹽酸溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色,煮沸2 min,冷卻后繼續(xù)滴定至溶液再呈暗紅色。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。記錄耗酸毫升數(shù)(V)。兩次標(biāo)定結(jié)果平均值作為鹽酸液的摩爾濃度,若兩次滴定結(jié)果誤差超過0.2%,需重新標(biāo)定。
C=m/([V1-V2)×0.053 0]
式中:C—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,mol/L;m—無水碳酸鈉的質(zhì)量的準(zhǔn)確數(shù)值,g; V1—消耗鹽酸溶液的體積,mL; V2—空白實(shí)驗(yàn)鹽酸溶液的體積數(shù)值,mL; 0.0530—碳酸鈉的毫摩爾質(zhì)量,g/mmol。
1.2.2硼酸接受液的配制
凱氏定氮儀使用含溴甲酚綠和甲基紅指示劑的1%的硼酸溶液。稱取100 g硼酸溶于10 L蒸餾水中,添加1 g/L的溴甲酚綠乙醇溶液100 mL和1 g/L甲基紅乙醇液70 mL。
1.2.3氧化鎂混懸液
取1.0 g氧化鎂,加100 mL水,振搖成混懸液。
1.3樣品處理
將樣品除去脂肪、骨及腱后,切碎攪勻,稱取約10.0 g,置于錐形瓶中,加100 mL水,不時(shí)振搖,浸漬30 min后過濾,濾液置冰箱備用。
1.4 凱氏定氮儀操作方法
1.4.1設(shè)定條件
啟動(dòng)凱氏定氮儀,進(jìn)入手動(dòng)模式,預(yù)熱蒸氣發(fā)生器5 min～10 min,之后添加硼酸吸收液(棄去前面的吸收液,直到開始流出正常酒紅色接收液為止)。選擇硼酸吸收液體積為30 mL,調(diào)節(jié)接收液體積,確定蒸餾時(shí)間為5 min,堿桶空著,按[選擇]鍵設(shè)定加堿時(shí)間為0 s。
1.4.2操作方法
準(zhǔn)確吸取10.0mL樣品濾液于消化管內(nèi),再加10mL氧化鎂懸液(10g/L),迅速將消化管放入儀器中。按[啟動(dòng)]鍵開始模式運(yùn)行樣品。首先運(yùn)行空白樣品,進(jìn)行空白檢測(cè)(空白體積值不得高于0.2 mL)。
蒸餾結(jié)束后,取下接收液瓶,用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定至紫紅色。
1.5結(jié)果計(jì)算
用本方法所測(cè)試樣中的揮發(fā)性鹽基氮的含量按下式進(jìn)行計(jì)算,計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
X=（(V1-V2)×C×14）/（m×10/100）×100
式中:X—樣品中揮發(fā)性鹽基氮的含量,mg/100g; V1—測(cè)定用樣液消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積,mL; V2—試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積,mL; C—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度,mol/L; 14—與1.00 mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 [C(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)馁|(zhì)量,mg; m—樣品質(zhì)量,g。
