四種測(cè)定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法比較
四種測(cè)定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法比較
三氯醋酸-丙酮沉淀法是最為常用的總蛋白提取方法,具有降低次生代謝物質(zhì)干擾、減少蛋白降解等優(yōu)點(diǎn)。該法所提取的蛋白,濃度較高,蛋白質(zhì)組分完全,各組分的量較均勻,雜質(zhì)少,離子濃度小,不僅可用于一維電泳( SDS-PAGE)分析,還可用于二維電泳(2-DE)分析。只不過(guò)該法成本較高,較為耗時(shí),操作也較為復(fù)雜。
PlantTotalProtein ExtractionKit試劑盒,是專(zhuān)門(mén)為提取各種植物組織優(yōu)質(zhì)全蛋白樣品,以便用于植物生物科學(xué)研究而設(shè)計(jì)的。用該法提取的總蛋白,濃度高,組分完全,各組分均勻,雜質(zhì)少,離子濃度小,用于SDS-PAGE和2-DE分析效果好。但是,操作復(fù)雜,成本高。為了降低成本,對(duì)此法進(jìn)行了改良,主要是將蛋白酶抑制劑混合物改為PMSF;雖然不如試劑盒的效果好,但仍能獲得良好效果。
Bradford法是常用的測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的方法,其測(cè)定結(jié)果基本上準(zhǔn)確,而且花費(fèi)低。不過(guò)當(dāng)提取的蛋白質(zhì)樣品含有變性劑、還原劑、解離劑和兩性電解質(zhì)時(shí),這些試劑可與考馬斯亮藍(lán)燃料結(jié)合,從而影響測(cè)定結(jié)果,但影響不大。
除了以上三種，凱氏定氮法是最為經(jīng)典的，也是標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法。其中，有凱氏定氮法衍生出來(lái)的定氮儀或者也叫做蛋白質(zhì)測(cè)定儀，是測(cè)定蛋白質(zhì)含量的主要儀器。該儀器具有測(cè)定速度快，同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品的特點(diǎn)，因此廣受歡迎。而粗蛋白測(cè)定儀正因?yàn)槠渥陨淼膬?yōu)勢(shì)，現(xiàn)已成為主流的測(cè)定方法。
